PREGLED SVIH FINANCIJSKIH I POSLOVNIH USLUGA, INTERNET USLUGE Pregled usluga
NOVI BRZI PREGLED ZAKONSKE REGULATIVE
Brzi pregled sadržaja propisa. Projekt je nastao za potrebe poslovnih ljudi koji kontinuirano prate pravnu regulativu kako bi se informirali da li je objavljen neki novi propis koji se odnosi na njihovu djelatnost. Radi brzog pregleda, na ovim stranicama nalazi se sažetak sadržaja, a klikom na link može se pregledati originalni izvor i cijeli sadržaj.
zg-iii-5-2-ako-se-tijekom-ldjm NN 150/2009

• III.5.3. Ukoliko se u primarnoj kulturi pojavi bakterijska kontaminacija, treba ponovno pripremiti test upotrebom homogenata tkiva pohranjenog na – 80 °C. Prije inokulacije, homogenat tkiva se centrifugira pri 4 000 x g kroz 30 minuta na temperaturi 0 do 6 °C, i supernatant se filtrira kroz 0,22 µm. Ukoliko se bakterijska kontaminacija pojavi tijekom faze subkultivacije, supernatant se filtrira kroz 0,22 µm, inokulira u svježe stanice i inkubira daljnjih 14 do 18 dana.

Stranica 2009-12-150-3665 NN 150/2009

• III.6.1.1. Stanice SHK-1 (pasaža 80 ili manje) ili stanice TO uzgajaju se u mediju L-15 koji sadrži 5% fetalnog goveđeg seruma, 2% (v/v) 200 mM L-glutamina i 0,08% (v/v) 50 mM 2-merkaptoetanola, na pločama s 24 ili 96 jažica, i upotrebljavaju se pri konfluenciji većoj od 50%. Mogu se upotrijebiti i druge stanične linije i hranljive podloge s dokazanom djelotvornošću. Dvjesto dvadeset pet µl supernatanta kulture, za koju se smatra da je zaražena virusom, dodaje se u svaku od dviju jažica, pomiješa se i 225 µl prenosi u dvije sljedeće jažice, pri razrjeđenju 1:5. Dvije dodatne jažice ostavljaju se neinokulirane i služe kao kontrola. Za uzorke iz različitih ribogojilišta koriste se posebne ploče kao i kontrole virusa. Za kontrolu virusa koristi se referentni izolat virusa ZAL.

Internet NN 150/2009

• III.6.1.2. Ploče se inkubiraju na 14 ± 2 °C i mikroskopski pregledavaju tijekom sedam dana. Kada se zapazi rani CPU ili se u roku od sedam dana CPU uopće ne zapazi, sljedeći korak je fiksiranje. U ovoj se fazi jažice ispiru PBS-om i fiksiraju inkubiranjem s 80% acetonom na sobnoj temperaturi tijekom 20 minuta. Ploče se suše na zraku i odmah obilježavaju, ili se pohranjuju na temperaturi od 0 do 6 °C ne više od 24 sata prije obilježavanja.

Internet stranice NN 150/2009

• III.6.1.3. Umnožene jažice se obilježavaju monoklonskim protutijelom 3H6F8 za virus ZAL ili drugim monoklonskim protutijelom koje ima dokazane učinkovitosti i specifičnosti, razrijeđeni u PBS-u i inkubiranih 30 minuta pri temperaturi od 37 ± 4 °C. Monoklonsko protutijelo se odstranjuje, a ploče se ispiru tri puta 0.05% otopinom Tween 20 u PBS-u. U svaku jažicu se dodaje protu-mišji IgG FITC konjugat razrijeđen u PBS-u, te se inkubira 30 minuta pri temperaturi od 37 ± 4 °C. Opaska: Svaki laboratorij optimizira razrjeđenje različitih serija monoklonskih protutijela i konjugata FITC-a. Antitijelo se odstranjuje a ploče se tri puta ispiru 0.05% otopinom Tween 20 u PBS-u.

Internet stranice NN 150/2009 • IV.1. Ovim odjeljkom opisani su postupci koji su potrebni za amplifikaciju dijela segmenta 8 genoma virusa ZAL pomoću metode PCR, što se može izvoditi na tkivu ribe ili na virusu ZAL u kulturi.
Internet stranice NN 150/2009 • (a) Iz svakog uzorka se odstranjuje RNAlater. U svaku epruvetu se dodaje 1 ml dH2 O obrađene DEPC-om, te se epruvete centrifugiraju pet minuta pri 13 000 okretaja u minuti na 0 do 6 °C.
Internet stranice NN 150/2009 • (b) Iz svakog uzorka se uklanja supernatant te se svakom uzorku i kontrolnoj epruveti koja sadrži prikladan kontrolni materijal (400 µl dH2 O ili homogenat bubrega riba koje nemaju specificirani uzročnik bolesti) dodaje 800 µl TRIzola (Invitrogen), ili nekog drugog reagensa za koji je dokazano da ima jednaku ili veću učinkovitost. Ako je potrebno, tkivo se cijepa ponovljenim pipetiranjem. Epruvete se inkubiraju pet minuta na sobnoj temperaturi. Svakoj epruveti se doda 160 µl kloroforma te se epruvete tri minute snažno tresu, a zatim petnaest minuta centrifugiraju pri 13 000 okretaja u minuti na 0 do 6 °C.
LINK - PREGLED SVIH FINANCIJSKIH I POSLOVNIH USLUGA, INTERNET USLUGE Pregled
Informacije NN 150/2009
• (d) Odstrani se supernatant i talogu RNA se doda 1 ml 75% etanola. Epruvete se zatim pet minuta centrifugiraju pri 6 500 okretaja u minuti na 0 do 6 °C.
Poslovne stranice NN 150/2009
• (e) Odstranjuje se supernatant i epruvete se oko tri minute ostavljaju otvorene kako bi ishlapio preostali etanol. Dodaje se 15 µl dH2 O obrađene DEPC-om kako bi se talog ponovno suspendirao te se po potrebi kratko vrtložno protrese.
Servis NN 150/2009 • (f) Za izračunavanje koncentracije RNA i čistoće uzorka koristi se spektrofotometar. Optička gustoća se mjeri pri 260 i 280 nm.
Glasnik NN 150/2009 • (a) Dva µl RNA se razrjeđuju u dH2 O obrađenoj DEPC-om u epruveti mikrocentrifuge od 1,5 ml. Kada je koncentracija RNA uzorka premala da bi se u RT reakciji omogučilo korištenje 2 µg, koristi se najveća moguća količina RNA. Razrijeđena RNA se inkubira 10 minuta na 55 do 60 °C.
Novo NN 150/2009 • (b) Potom se epruvete koje sadrže RNA stavljaju na led, te se dodaju RT reagensi da bi se dobile konačne sljedeće koncentracije: 1 x pufer, 1 mM dNTP, 100 ng nasumičnih heksamera, 20 U RNase inhibitora i 200 U MMLV-RT u ukupnom volumenu od 20 µl.
Poslovi NN 150/2009 • (b) Epruvete se stavljaju na pet minuta u termocikler programiran na 94 °C, nakon čega slijedi 35 ciklusa na 94 °C jednu minutu, na 55 °C jednu minutu i na 72 °C jednu minutu, s konačnom inkubacijom na 72 °C u trajanju od pet minuta.
Poticaji NN 150/2009 • (c) Rezultati PCR-a se ocjenjuju nakon elektroforeze upotrebom 2% agaroznog gela obojenog etidijevim bromidom, uključujući markere veličine duž uzoraka i negativne kontrole iz faza RT-a i PCR-a. Smatra se da je jedan produkt PCR-a od 155 bp indikativan za prisutnost RNA virusa ZAL. Za uzorke koji sadrže jedan dodatan produkt od 310 bp, također se smatra da sadrže RNA virusa ZAL. Uzorci koji daju više produkata PCR-a, uključujući najmanje jedan od približno 155 bp, mogu sadržavati RNA virus ZAL. Oni se mogu dalje istraživati upotrebom DNA probe ili sekvencioniranjem nukleotida.
PRETHODNO - SLJEDEĆA STRANICA IZBOR: Broj 112/04, Broj 96/09, Broj 57/07, Broj 92/05, Broj 11/94, Broj 109/08
LINK - VODIČ KROZ POSLOVNE USLUGE KOJE SU VAM DOSTUPNE Pregled