PREGLED SVIH FINANCIJSKIH I POSLOVNIH TEMA, INTERNET USLUGE 
BESPLATNI PREGLED PRAVNE REGULATIVE
Brzi pregled sadržaja propisa. Projekt je nastao za potrebe poslovnih ljudi koji kontinuirano prate pravnu regulativu kako bi se
informirali da li je objavljen neki novi propis koji se odnosi na njihovu djelatnost.
Radi brzog pregleda, na ovim stranicama nalazi se sažetak sadržaja, a klikom na link može se pregledati originalni izvor i cijeli sadržaj.
NN 142/2008 • Ako se tijekom prva tri dana inkubacije javi toksični CPU, u toj se fazi može provesti supkultivacija, ali se stanice potom moraju inkubirati sedam dana i ponovo supkultivirati uz dodatnih sedam dana inkubacije. Ako se toksični CPU razvije nakon tri dana, stanice se mogu jednom staviti u pasažu i inkubirati dok ne prođe ukupno 14 dana od primarne inokulacije. U zadnjih sedam dana inkubacije ne smiju se javiti znaci toksičnosti.
NN 142/2008 • Ako unatoč obradi antibioticima dođe do bakterijske kontaminacije, prije supkultivacije treba provesti centrifugiranje na 2000 do 4000 x g kroz 15 do 30 minuta pri 2 do 5°C i/ili filtriranje supernatanta kroz filtar od 0,45 µm (membrana s niskom sposobnošću vezanja proteina). Pored toga, postupak supkultivacije isti je kao i za toksični CPU.
NN 142/2008 • Ako se u staničnoj kulturi uoči postojanje CPU-a, medij (supernatant) se sakupi i pretraži korištenjem jedne ili više sljedećih metoda: neutralizacija, IF, ELISA. Ako se ovim testovima ne može sa sigurnošću identificirati virus u roku od jednog tjedna, supernatant se mora proslijediti u nacionalni referentni laboratorij ili u referentni laboratorij Europske unije za bolesti riba kako bi se virus odmah identificirao.
NN 142/2008 • Alikvoti dvaju razrjeđenja supernatanta se pomiješaju i odvojeno inkubiraju 60 minuta pri 15°C s jednakim dijelovima sljedećih reagensa:
NN 142/2008 • – serum koji sadrži skupinu specifičnih protutijela za virus VHS u razrjeđenju 1:50 (vol:vol)[9]
NN 142/2008 • – serum koji sadrži skupinu specifičnih protutijela za virus ZHN u razrjeđenju 1:50 (vol:vol)[10]
NN 142/2008 • – skupni uzorak antiseruma za lokalne serotipove virusa ZNG u razrjeđenju 1:50 (vol:vol)[11]
NN 142/2008 • Za svaku mješavinu supernatanta virusa i seruma se najmanje dvije stanične linije inokuliraju s 50 µl i inkubiraju pri 15°C. Razvoj citopategenog učinka (CPU) provjerava se kako je opisano u Poglavlju III. točki 4. ovoga Dijela.
NN 142/2008 • Neki sojevi virusa VHS ne reagiraju u neutralizacijskom testu. Takvi se izolati moraju identificirati metodom IF ili ELISA.
NN 142/2008 • Mogu se primijeniti i drugi neutralizacijski testovi dokazane djelotvornosti.
LINK - PREGLED SVIH FINANCIJSKIH I POSLOVNIH TEMA, INTERNET USLUGE
NN 142/2008 • Za svaki izolat virusa koji treba identificirati, najmanje osam pokrovnih stakalaca ili njihovih ekvivalenata treba nasaditi stanicama u gustoći tako da se postigne približno 60 do 90%-tna konfluencija 24 sata nakon nasađivanja. U tu se svrhu preporučuju stanice EPC jer one snažno prianjaju za staklenu površinu, ali se mogu koristiti i druge stanične linije kao što su BF-2, RTG-2 ili FHM.
NN 142/2008 • Nakon što se stanice natalože na staklenu površinu (otprilike jedan sat nakon nasađivanja) ili nakon što su kulture bile inkubirane u razdoblju do 24 sata, inokulira se virus koji treba biti identificiran Četiri kulture se inokuliraju u volumnom omjeru 1:10, a četiri kulture u omjeru 1:1000. One se potom inkubiraju 20 do 30 sati pri 15°C.
NN 142/2008 • Nakon inkubacije, kulture se dva puta ispiru u Eaglovom MEM-u bez seruma, fiksiraju u 80%-tnom ledeno hladnom acetonu i potom boje dvoslojnim IFAT-om. Prvi sloj reagensa sastoji se od poliklonalnih ili monoklonalnih protutijela referentne kvalitete. Drugi sloj reagensa je fluorokromom konjugirani antiserum za imunoglobulin korišten u prvom sloju. Za svaki pretraživani antiserum mora se obojiti najmanje jedna kultura inokulirana visokom dozom i jedna kultura inokulirana niskom dozom. U test se moraju uključiti i odgovarajuće negativne i pozitivne kontrole. Preporučuju se fluorokromi kao što su FITC i TRITC.
NN 142/2008 • Na obojene kulture nanesite fiziološku otopinu s dodatkom glicerola. Pregledajte ih pod ulaznim ultraljubičastim svjetlom. Koristite okulare s povećanjem od 10 ili 12 puta te objektive s povećanjem od 25 ili 40 puta, s numeričkim otvorima > 0,7 odnosno 1,3.
NN 142/2008 • Gore opisani postupak imunofluorescencije (IF) naveden je kao primjer. Umjesto njega mogu se koristiti i drugi postupci imunofluorescencije (s obzirom na stanične kulture, fiksiranje i protutijela referentne kvalitete) dokazane učinkovitosti.
NN 142/2008 • Jažice na mikrotitarskoj plitici prekriju se preko noći preporučenim razrjeđenjima pročišćenih frakcija imunoglobulina protutijela referentne kvalitete.
NN 142/2008 • Nakon ispiranja jažica puferom PBS-Tween-20, u njih se dodaje virus koji treba identificirati, i to u serijama dvostrukog ili četverostrukog razrjeđenja, te se ostavi da reagira s adsorbiranim protutijelom 60 minuta pri 37°C. Nakon ispiranja puferom PBS-Tween-20, dodaju se biotinom obilježena protutijela čija specifičnost odgovara specifičnosti adsorbiranih protutijela te se ostave da reagiraju 60 minuta pri 20°C. Nakon još jednog ispiranja kao što je gore opisano, dodaje se streptavidin konjugiran s peroksidazom hrena (HRP) te se ostavi da reagira jedan sat pri 20°C. Nakon zadnjeg ispiranja, vezani enzim se vizualizira uporabom odgovarajućih supstrata ELISA (OPD ili drugi).
NN 142/2008 • Gore opisana verzija metode ELISA, koja se temelji na primjeni biotina i avidina, navedena je samo kao primjer. Mogu se koristiti i druge inačice metode ELISA dokazane učinkovitosti.
NN 142/2008 • Broj kliničkih pregleda na godinu (dvije godine)Broj laboratorijskih pretraga na godinu (dvije godine)Laboratorijsko pretraživanje na prisutnost virusa 1
NN 142/2008 • Broj riba iz uzgoja (materijal organa)Broj matičnih riba (ovarijalna tekućina)
PRETHODNA STRANICA - SLJEDEĆA 
IZBOR:
Broj 60/07, Broj 83/00,
Broj 3/09, Broj 107/93,
Broj 9/07, Broj 50/92
LINK - PREGLED SVIH FINANCIJSKIH I POSLOVNIH TEMA ZA PODUZETNIKE