PREGLED SVIH FINANCIJSKIH I POSLOVNIH TEMA, INTERNET USLUGE Pregled usluga
BESPLATNI PREGLED PRAVNE REGULATIVE
Brzi pregled sadržaja propisa. Projekt je nastao za potrebe poslovnih ljudi koji kontinuirano prate pravnu regulativu kako bi se informirali da li je objavljen neki novi propis koji se odnosi na njihovu djelatnost. Radi brzog pregleda, na ovim stranicama nalazi se sažetak sadržaja, a klikom na link može se pregledati originalni izvor i cijeli sadržaj.
Stranica HR2009-12-150-3665 NN 150/2009

• IV.1.4. Potvrđivanje izolacije virusa ZAL u kulturi tkiva pomoću PCR-a

Stranica 2009-12-150-3665 NN 150/2009

• Ako se u SHK-1 stanicama tijekom virološkog pregleda uzoraka tkiva pojavi potpuni CPU, iz jažice treba odstraniti 400 µl supernatanta i staviti je u sterilnu epruvetu veličine 1,5 ml. Iz ovoga se uzorka ekstrahira RNA, kako je utvrđeno u točki III.1. Dijela III. ovoga Dodatka, te se izvodi RT-PCR. Ukoliko se upotrebljavaju kulture bez potpunog CPU, uklanja se supernatant, stanice se sastružu s površine jažice ili bočice i stave se u sterilnu epruvetu od 1,5 ml radi ekstrahiranja RNA i provođenja RT-PCR.

Stranica 2009-12-150-3665 NN 150/2009

• (a) Specifičnost produkta PCR-a od 155 bp ocjenjuje se sondiranjem pomoću oligonukleotida koji se hibridizira na području produkta PCR-a unutar starter-molekula. Produkti PCR-a se podvrgavaju elektroforezi u 1% agaroznom gelu uključujući markere veličine duž uzoraka te pozitivnu kontrolu i negativne kontrole iz faza RT-a i PCR-a.

Stranica 2009-12-150-3665 NN 150/2009

• (c) Nepovezane i nespecifično povezane probe ispiru se s membrane, te se povezane probe vizualiziraju.

Internet NN 150/2009
• (d) Probe povezane s fragmentom od 155 bp (i 310 bp, ako je prisutan) predstavljaju dokaz za specifičnost PCR-a i pokazuju da je u uzorku prisutna RNA virusa ZAL.
Internet stranice NN 150/2009
• Specifičnost PCR-a se može ocijeniti pregledom nukleotidnog slijeda produkta PCR-a od 155 bp.
Internet stranice NN 150/2009 • (b) Fragment se sekvencionira upotrebom istih starter-molekula koje su upotrijebljene u PCR-u ili vektorskih starter-molekula ukoliko su bile klonirane u vektoru prije sekvencioniranja.
Internet stranice NN 150/2009 • (c) Nukleotidna sekvenca se uspoređuje s onom za segment 8 virusa ZAL koji je dostupan u EMBL bazi podataka nukleotidnog sekvencioniranja (pristupni brojevi su Y10404, AJ012285, AJ 242016).
Internet stranice NN 150/2009 • (d) Prisutnost slijeda koji odgovara onom za segment 8 virusa ZAL predstavlja dokaz da uzorak sadrži RNA virus ZAL.
Internet stranice NN 150/2009 • V.1. Za pretraživanje otisaka bubrega metodom IFAT uspostavljen je sljedeći protokol
LINK - PREGLED SVIH FINANCIJSKIH I POSLOVNIH TEMA, INTERNET USLUGE Pregled
Vijesti NN 150/2009 • V.2.1. Predmetnice se tri minute fiksiraju u acetonu ili metanolu/acetonu (1 : 1) i zatim osuše na zraku. Prije bojenja pregleda se svaka predmetnica i odgovarajuća područja se zaokruže pomoću olovke ImmEdgeTM ili na sličan način, te se ostavi da se osuši na zraku. Predmetnice se zatim stave u otopinu za blokiranje (6% obrano mlijeko u PBS-u koji sadrži 0.2% Tween 20), te se 30 minuta inkubiraju na sobnoj temperaturi uz lagano protresanje. Svako takvo stakalce se osuši i spremi vodoravno u kutiju za predmetnice koja sadrži vlažnu maramicu za održavanje vlažne atmosfere.
Informacije NN 150/2009 • Svako se stakalce pretraži mikroskopom prikladnim za epi-fluorescentno osvjetljenje, upotrebom odgovarajućeg filtra koji pobuđuje FITC na emitiranje karakteristične zelene fluorescencije. Sva polja unutar područja označenog pomoću olovke ImmEdgeTM pretražuju se pod objektivima x10 i x20, a sumnjiva područja (ona koja pokazuju zelenu fluorescenciju) dodatno se pretražuju pod objektivom x40 i fazno/fluorescentnim osvjetljenjem kako bi bili sigurni da je fluorescentna obojenost povezana sa stanicama. Fazne koordinate sumnjivih područja treba zabilježiti radi kasnijeg potvrđivanja prirode fluorescencije koje obavlja drugi ispitivač. Nakon pregleda koji obavi prvi ispitivač, stakalca koja su pozitivna ili sumnjiva ponovno pretražuje drugi ispitivač i potvrđuje rezultate.
Poslovne stranice NN 150/2009 • V.4.1. Za svaku seriju stakalaca obojenih za IFAT, moraju biti uključena tri tipa kontrole:
Pregledi NN 150/2009 • – otisak bubrega od nezaraženog atlantskog lososa (negativna kontrola),
Besplatno NN 150/2009 • – nezaražena stanična kultura SHK-1 ili druga prijemljiva stanična kultura (negativna kontrola),
Glasnik NN 150/2009 • – stanična kultura SHK-1 ili druga prijemljiva stanična kultura zaražena virusom ZAL (pozitivna kontrola).
Propis NN 150/2009 • V.4.2. Ukoliko je dostupno kao dodatna pozitivna kontrola, preporučuje se otisak bubrega od atlantskog lososa zaraženog virusom ZAL.
Propis NN 150/2009 • V.4.3. Ako se s bilo kojom od negativnih kontrola dobije pozitivan rezultat, test se smatra nevaljalim za sva stakalca u toj seriji. Ako se za sva stakalca u seriji, uključujući pozitivne kontrole, dobije negativan rezultat, test se smatra nevaljalim za sva stakalca u toj seriji. U slučaju kada nevaljale kontrole obezvrijede cijelu seriju stakalaca, ta se stakalca moraju uništiti te se izvodi ponovno testiranje upotrebom dupliciranih otisaka.
Propis NN 150/2009 • Ova se tehnika može primijeniti na druga tkiva ribe, kao što su jetra, slezena i srce, pod uvjetom da se na stakalce može prenijeti dovoljna količina endotelnih stanica, leukocita ili limfocita. Postupak bojenja ostaje isti za sva tkiva, iako je kod nekih tkiva bolje izostaviti bojenje propidijevim jodidom, očekujući da će se tipovi stanica prisutni u otisku identificirati faznim osvjetljenjem.
Propis NN 150/2009 • Djelići preparirani parafinom režu se na veličinu od 5 µm i boje upotrebom hematoksilina i eozina. Histološke promjene povezane s ZAL opisane su u trenutno važećem izdanju OIE Dijagnostičkog priručnika za bolesti životinja akvakulture.
PRETHODNA STRANICA - SLJEDEĆA IZBOR: Broj 87/09, Broj 57/00, Broj 42/95, Broj 25/04, Broj 112/09, Broj 34/93
LINK - PREGLED SVIH FINANCIJSKIH I POSLOVNIH TEMA ZA PODUZETNIKE Pregled